Den polymeraskedjereaktion , eller PCR , är en teknik i molekylärbiologi för att amplifiera specifika regioner av DNA. PCR är beroende av primrar , vilka är korta DNA-strängar som är komplementära och specifika för DNA av intresse . Medan primers generellt kommer att binda till DNA matchar deras sekvens , de ibland kommer att binda till och förstärker varandra , vilket gör att fenomen som kallas en primer dimer.Things Du behöver
Primersekvenser
Visa fler Instruktioner
1
Undersök GC-innehåll ( antal G : s och C : s ) i din primer sekvens. GC bindning är starkare än AT bindning på grund av den extra vätebindningenmellan guanin och cytosin . Optimal bindning är minst 50 procent GC innehåll. Köpa 2
Undersök annealingtemperaturen för din reaktion . Low glödgningstemperaturer , definieras i allmänhet som 55 C eller lägre , kan orsaka icke-specifik bindning av primern , vilket kan orsaka primerdimerer förutom amplifiering av felaktiga genomiska sektioner.
3
Dubbel -Kontrollera mängden och koncentrationen av primers som du lagt till PCR . Ett överskott av primer , i allmänhet mer än 75 picomol , kan orsaka primerdimerer , liksom. Addera