En av de vanligaste metoderna för att beräkna en proteinkoncentration i laboratoriemiljö är att använda en Bradford -analys . The Bradford -reagens är ett kolorimetriskt reagens som ändrar färg baserat på proteinkoncentration . Genom att kombinera en känd standardkurva med Bradford reagens , kan du skapa en rättsakt som du kan beräkna koncentrationen av något protein , inklusive antibodies.Things Du behöver
Renad antikropp i en känd buffert
buffert matchar suspension av antikroppen
Lyofiliserat bovint serumalbumin (BSA ) katalog Microcentrifge rör
Laboratory penna
vortexblandare
Laboratorieskala
Vägnings papper
1ml pipett Flighter Bradford -reagens
Multi -brunnar
kolorimetrisk plattläsare
Microsoft Excel Review Lab bok
Pen
Visa fler instruktioner , Skapa en standard
1
Mät 200 mg BSA på vägningspappermed hjälp av en laboratorieskala . Inneslut den i ett mikrocentrifugrör. Tillsätt 2 ml buffert till mikrocentrifugrör innehållande 200 mg av BSA. Märk detta rör ” 1 ” köpa 2
Vortex Tube 1 tills BSA är helt upplöst .
3
Ta bort 500 ul av BSA i buffert och överföring den till ett andra rör . Märk detta rör ” 2 ” Tillsätt 500 ul vanligt buffert till Tube
2
4
Ta bort 200 ul BSA i buffert från Rör 1 och överföra det till ett nytt rör . Märk detta rör ” 3 ” Lägg 800 ul vanligt buffert till Tube 3
5
Ta bort 100 ul BSA i buffert från Rör 1 och överföra det till ett nytt rör . Märk detta rör ” 4 ” Lägg 900 ul vanligt buffert till Tube
4.
6
Ta bort 10 ul av BSA i buffert från Rör 1 och överföra det till ett nytt rör . Märk detta rör ”5” Lägg 990 ul vanligt buffert till Tube 5. Rör 1- 5 innefattar en graderad standardserie . Det första röret har en känd koncentration av 100 mg /ml ; den andra , 50 mg /ml; den tredje, 20 mg /ml , den fjärde, 10 mg /ml; och den femte , 1 mg /ml . Varje rör innehåller cirka 1 ml lösning .
Skapa Antibody Späd
7
Lägg 5 0UL renad antikropp till 95 0UL buffert . Märk detta rör ” A. ”